Mitrovske zadušnice obeležavaju se uvek u subotu pre praznika Svetog velikomučenika Dimitrija, odnosno Mitrovdana, koji se slavi 8. novembra.
Zadušnice su dan posvećen sećanju na preminule, a u crkvama se služe liturgije i parastosi. Nakon bogosluženja, vernici odlaze na groblja, gde se pale sveće i obavljaju pomeni za pokojne.
Nakon odlaska u crkvu, ide se na groblje Prema pravoslavnom običaju, na grobove se iznose kuvano žito, crno vino i sveće. Žito simbolizuje vaskrsenje i večni život, dok sveća predstavlja svetlost Hristovu. Vino kojim sveštenik preliva žito simbolizuje Božje milosrđe.
U većem delu Srbije zadržan je i običaj iznošenja hrane na groblje, koja se potom deli sa drugim ljudima u znak sećanja na pokojne. Na zadušnice se posebna pažnja posvećuje i milostinji, pa se vernicima preporučuje da pomognu onima kojima je pomoć potrebna.
U crkvenom kalendaru postoje četiri velike zadušnice tokom godine: zimske, Duhovske, Miholjske i Mitrovske. Sve se obeležavaju subotom, koja je u pravoslavnoj tradiciji posebno posvećena molitvenom sećanju na preminule.